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龍膽瀉肝湯加減方이 고콜레스테롤식이로 유발된 고지혈증 및 산화적 손상에 미치는 영향 : 용담사간탕가감방

Studies on the efficacy of Yongdamsagantanggagambang on High cholesterol diet-induced hyperlipidemia And Oxidative stress

  • 최성안 (Sung-an Choi, 동신대학교 일반대학원 한의학과)

초록/요약

최근 생활 환경의 변화, 식생활의 서구화, 스트레스 등으로 인하여 각종 심혈관계 질환이 증가하고 있는 추세이며1, 그 중 고혈압, 허혈성 심장질환, 혈관 질환 등 동맥경화성 질환의 발생빈도가 크게 늘어나고 있다2. 동맥경화증의 원인으로는 고지혈증, 고혈압, 비만, 흡연, 당뇨병 등이 있는데3, 그 중 고지혈증은 동맥경화증의 가장 중요한 인자 중 하나로 동맥 혈관벽에 콜레스테롤 등의 지질이 침착하여 혈관을 협착시키거나 경화시켜 혈액의 흐름을 악화시키는 것으로 순환기 질환의 공통 병인으로 인식되고 있으며, 이에 대한 치료 방법이 다양하게 연구되고 있다4,5. 산화적 손상이란 인체는 항상성을 유지하기 위해 산화 촉진물질과 산화 억제물질 사이에 균형을 이루는데, 이 균형이 깨져 산화가 촉진되게 되면 세포에 유해한 작용을 하는 것을 말한다6. 산화적 손상에 관여하는 인자는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)과 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNS)이 있다7,8. 韓醫學에서 고지혈증은 飮食不節, 運動不足, 七情內傷, 先天不足 및 臟腑機能失調로 인한 脾의 運化 및 肝의 疏泄不足, 腎陰不足 및 命門火衰로 濕濁한 穢濁之氣가 체내에 停留되어 血液에 痰飮, 瘀血이 발생된 것으로 인식되고 있다9,10. 고지혈증에 대한 최근의 연구로는 加味溫膽湯, 生津養血湯, 雙降湯, 降脂通脈飮, 夏枯草散, 石決明湯加味 등의 처방11-16을 이용한 연구와 桑枝, 地骨皮, 澤瀉, 茵蔯 등의 단미제17-20를 이용한 연구 등이 있다. 龍膽瀉肝湯은 金·元代 李東垣21의 《東垣十書-蘭室秘臧》에 수록된 처방으로 瀉肝淸膽, 淸熱利濕하는 효과가 있어 肝膽濕熱로 인한 小便淋濁, 陰腫, 陰痒 등 제반 증상을 치료한다. 실험 및 임상 연구로 항바이러스22,23, 지혈24, 항염증25, 혈압강하26 등에 관한 연구 등이 있었으나, 고지혈증 및 산화적 손상과 관련된 연구는 보고된 바가 적었다. 이에 저자는 龍膽瀉肝湯加減方을 이용하여 고지혈증 및 산화적 손상에 대한 효과를 확인하기 위해 고 cholesterol 식이로 유발된 고지혈증 생쥐에 龍膽瀉肝湯加減方 추출물을 경구 투여하여 체중 변화, 콜레스테롤 수치 변화, 혈청 내 염증성 cytokine 인자의 수치 변화, 간의 무게 변화, 간의 조직 검사, 항산화 효과 등을 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

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목차

ABSTRACT I

Ⅰ. 서 론 1

Ⅱ. 실험 방법 3
1. 재료 3
1) 약재 3
2) 동물 및 사육조건 4
3) 세포 6
4) 시약 7
5) 기기 7
2. 방법 8
1) 검액의 조제 8
2) HPLC 분석 8
3) 안전성 검사 9
(1) 중금속 검사 9
(2) 간 독성 검사 9
(3) 신 독성 검사 10
(4) 세포 독성 측정 10
4) In vivo 11
(1) 고지혈증 유도 및 약물투여 11
(2) 혈액화학적검사 11
(3) 혈청 내 염증성 cytokine 측정 11
(4) 체중 및 간 무게 측정 12
(5) 조직병리학적검사 12
(6) 면역조직화학검사 14
5) In vitro 14
(1) 세포 배양 14
(2) 항산화 효능 측정 15
① 총 폴리페놀 함량 측정 15
② DPPH radical 소거능 측정 15
③ ABTS radical 소거능 측정 16
④ Reactive oxygen species(ROS) 생성 측정 16
⑤ Nitric oxide(NO) 생성 측정 17
3. 통계처리 17

Ⅲ. 실험결과 18
1. HPLC pattern 분석 18
2. 안전성 검사 19
1) 중금속 함량 19
2) 간 독성 평가 20
(1) Aspartate aminotransferase(AST) 20
(2) Alanine aminotransferase(ALT) 21
(3) Alkaline phosphatase(ALP) 22
3) 신 독성 평가 23
(1) Creatinine 23
(2) Blood urea nitrogen(BUN) 24
4) 세포 독성 평가 25
3. In vivo 분석 26
1) 혈중 콜레스테롤에 미치는 영향 26
(1) Total cholesterol에 미치는 영향 26
(2) LDL 콜레스테롤에 미치는 영향 27
(3) HDL 콜레스테롤에 미치는 영향 28
2) TG에 미치는 영향 29
3) Glucose에 미치는 영향 30
4) 혈청 내 염증성 cytokine에 미치는 영향 31
(1) IL-1β 생성에 미치는 영향 31
(2) IL-6 생성에 미치는 영향 32
(3) TNF-α 생성에 미치는 영향 33
5) 체중 변화에 미치는 영향 34
6) 간 조직 무게에 미치는 영향 35
7) 간 조직 염색 관찰 36
(1) 간 조직의 세포형태 변화에 미치는 영향 36
(2) 간의 섬유화 양상 37
(3) 간 조직의 ADRP 발현 변화에 미치는 영향 38
4. In vitro 분석 39
1) 항산화 효능에 미치는 영향 39
(1) 총 폴리페놀 함량 39
(2) DPPH radical 소거능에 미치는 영향 40
(3) ABTS radical 소거능에 미치는 영향 41
(4) ROS 생성에 미치는 영향 42
(5) NO 생성에 미치는 영향 43

Ⅳ. 고 찰 44

Ⅴ. 결 론 55

참고문헌 57


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