칡잎 (Pueraria thunbergiana L.) 분획물의 피부 생리활성 증진 효과 및 메커니즘 분석
Skin Biological Activity Enhancement Effect and Mechanism Analysis of Pueraria thunbergiana L. Fraction.
- 주제(키워드) "Pueraria thunbergiana" , "anti-melanogenesis" , "anti-wrinkle"
- 발행기관 동신대학교 일반대학원
- 지도교수 박경목
- 발행년도 2021
- 학위수여년월 2021. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 대학원 제약공학과
- 원문페이지 79
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/dsu/200000360927
- UCI I804:46001-200000360927
- 본문언어 한국어
- 저작권 동신대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
Kudzu (Pueraria thunbergiana)는 Fabaceae 종에 속하는 덩굴 식물로 뿌리와 꽃에는 다양한 약효가 있다. 특히 뿌리는 갱년기, 당뇨병 관리, 심혈관 질환 예방, 항산화, 고혈압 및 항염 효과에 대해 알려져 있다. P. thunbergiana의 뿌리는 다양한 식품 및 의약품에 널리 사용되는 반면에, 지상부는 일반적으로 폐기물로 처리된다. 따라서 본 연구에서는 잎을 사용하여 피부 미백 및 항노화 관련 기능성 화장품의 천연 소재로서의 사용 가능성을 평가했다. 잎의 30% EtOH에서 추출한 추출물을 n-hexane (H), ethyl acetate (EtOAc), butanol (B) 및 water (W)로 분획하여 항산화 활성과 미백 및 항노화 효과를 측정하였다. 먼저 분획을 위한 추출물을 선정하기 위하여 칡잎의 EtOH 농도별 추출물들의 폴리페놀 및 플라보노이드 함량, 항산화 및 세포 내 미백 활성의 측정 결과, 종합해 보면 다른 EtoH 농도별 추출물에 비해 30% EtOH 추출물이 높은 미백 활성을 보였다. 그리고 분획물들 중에서 EtOAc 분획물이 높은 페놀 및 플라보노이드를 함유하고 다른 분획물보다 더 높은 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타냈다. 그리고 B16F10 melanoma 세포에서 EtOAc 분획물이 α-MSH 유도 멜라닌 합성을 현저하게 억제함을 확인하였으며, MITF 단백질 발현을 감소시켰다. 또한, EtOAc 분획물은 HaCaT 세포에서 UVB에 대한 보호효과를 보였고, UVB로 인해 감소된 pro-collagen 합성량을 증가시켰다. 그리고 HaCaT 세포와 HDF-n 세포에서 MMP-1 저해 활성 및 MMP-1 단백질 발현을 감소시킨 것을 확인하였다. 이러한 결과는 EtOAc 분획물이 다른 분획물에 비해 우수한 항산화 활성과 멜라닌 생성 억제 및 항노화 효과를 가지고 있음을 나타낸다. 따라서, P. thunbergiana 잎의 EtOAc 분획물은 미백 및 항노화 관련 기능성 화장품 소재로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
more목차
목 차
국문초록 ----------------------------------------------- ⅳ
Ⅰ. 서 론 ------------------------------------------------ 1
Ⅱ. 재료 및 방법 ----------------------------------------- 4
1. 실험재료 ---------------------------------------------- 4
1.1 추출 및 분획물 제조 ----------------------------------- 4
1.2 시약 및 기기 ----------------------------------------- 6
1.3 세포주 ---------------------------------------------- 7
2. 실험방법 ---------------------------------------------- 7
2.1 총 폴리페놀 함량 측정 --------------------------------- 7
2.2 총 플라보노이드 함량 측정 ------------------------------ 7
2.3 DPPH radical 소거능 측정 ------------------------------ 8
2.4 ABTS radical 소거능 측정 ------------------------------ 8
2.5 세포 생존율 측정 (MTT assay) -------------------------- 9
2.6 Melanin 함량 측정 ------------------------------------ 9
2.7 세포 내 tyrosinase 저해 활성 측정 ----------------------- 10
2.8 UVB 조사 후 보호효과 측정 ---------------------------- 10
2.9 Type-1 pro-collagen 생합성 측정 ----------------------- 10
2.10 MMP-1 저해 활성 측정 ------------------------------- 11
2.11 Western Blot -------------------------------------- 12
2.12 High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) 분석---- 12
3. 통계처리 --------------------------------------------- 13
Ⅲ. 실험결과 -------------------------------------------- 14
1. 칡잎 EtOH 농도별 추출물의 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 측정 ---------------------------------------------------- 14
2. 칡잎 EtOH 농도별 추출물의 항산화 활성 -------------------- 16
3. 칡잎 EtOH 농도별 추출물의 B16F10 melanoma 세포 생존율---- 19
4. 칡잎 EtOH 농도별 추출물의 세포 내 미백 활성 --------------- 21
5. 칡잎 분획물의 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 ------------ 24
6. 칡잎 분획물의 항산화 활성 ------------------------------- 26
7. 칡잎 분획물의 세포 생존율 ------------------------------- 29
8. Melanin 생성에 대한 효과 ------------------------------- 31
9. Western Blot을 이용한 칡잎 EtOAc 분획물의 멜라닌 생성 관련 단백질 발현에 대해 미치는 영향 ------------------ 34
10. 칡잎 EtOAc 분획물의 HaCaT 세포와 HDF-n 세포 생존율------ 36
11. 칡잎 EtOAc 분획물의 UVB에 의한 세포 손상에 따른 보호 효과 -------------------------------------------------------- 39
12. 칡잎 EtOAc 분획물의 Type 1 pro-collagen 생합성에 대한 효과------------------------------------------------------- 41
13. MMP-1 저해 활성에 대한 효과 --------------------------- 43
14. Western Blot을 이용한 칡잎 EtOAc 분획물의 노화 관련 단백질 발현에 대해 미치는 영향 -------------------------- 46
15. High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) 분석을 통한 주요 성분 확인 -------------------------------- 50
Ⅳ. 고 찰 ---------------------------------------------- 53
Ⅴ. 결 론 ---------------------------------------------- 56
Ⅵ. 참고문헌 ------------------------------------------- 58
Ⅶ. ABSTRACT ---------------------------------------- 70